距孙中山逝世仅5个月，廖仲恺又遭到国民党右派暗杀，年仅48岁。1926年1月，在中国国民党第二次全国代表大会上，何香凝被选为中央执行委员，任妇女部长。1926年3月20日，蒋介石制造了“中山舰事件”，逮捕了共产党人李之龙，并包围了苏联顾问团住宅和省港罢工委员会。何香凝不顾全市武装戒严，冒险找到蒋介石，含泪厉声斥责。蒋介石以“改善中国国民党与共产党间的关系”为名，通过了一个公开排斥和打击共产党人的“整理党务案”。何香凝挺身而出，和国民党中央委员、海外部长彭泽民、江苏代表柳亚子等，向国民党右派分子提出了强烈抗议。何香凝慷慨力陈议案的谬误，说到愤慨时，“义愤填膺，拍案顿足，几乎把地板跺裂”。1927年4月12日，蒋介石在上海发动政变，背叛孙中山的政纲政策，屠杀共产党人和革命群众。何香凝无比愤慨，即于13日晚在汉口发表了一篇著名的声讨叛逆的演说，并与国民党左派宋庆龄、邓演达及中国共产党人董必武等40人，联合发表了《讨蒋通电》。